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如何制備DOPE-ICG?

2025-01-16 [51]

1.物理混合法

  • 原理

    • 基于 DOPE 和 ICG 之間的物理相互作用,如疏水相互作用。DOPE 的疏水部分(脂肪酸鏈)能夠與 ICG 分子的疏水區(qū)域相互吸引,從而將 ICG 包裹在 DOPE 形成的結(jié)構(gòu)中,形成 DOPE - ICG 復(fù)合物。

步驟

  • 溶解 DOPE:將 DOPE 溶解在合適的有機(jī)溶劑中,常用的有機(jī)溶劑有氯仿或二氯甲烷。例如,在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中,將適量的 DOPE(如 10 - 100mg)加入到裝有 1 - 10mL 氯仿的玻璃容器中,使用磁力攪拌器攪拌,直至 DOPE 全溶解,得到澄清的 DOPE 溶液。

  • 溶解 ICG:同時(shí),將 ICG 溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?。由?ICG 在水中溶解度較低,通常選擇二甲基亞砜(DMSO)或 N,N - 二甲基甲酰胺(DMF)作為溶劑。例如,將一定量的 ICG(如 1 - 10mg)加入到 0.1 - 1mL 的 DMSO 中,超聲處理數(shù)分鐘,使其全溶解,形成 ICG 溶液。

  • 混合溶液:在溫和攪拌的條件下,將 ICG 溶液緩慢滴加到 DOPE 溶液中。滴加過(guò)程要緩慢,以確保 ICG 能夠均勻地分散在 DOPE 溶液中。例如,使用滴管逐滴加入 ICG 溶液,同時(shí)保持?jǐn)嚢杷俣仍?100 - 500rpm 左右。

  • 去除溶劑:將混合溶液轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中,在適當(dāng)?shù)臏囟龋ㄈ?30 - 50℃)和真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),去除有機(jī)溶劑。隨著溶劑的蒸發(fā),DOPE 和 ICG 會(huì)逐漸聚集形成復(fù)合物。當(dāng)溶劑基本去除后,可得到含有 DOPE - ICG 復(fù)合物的固體或半固體物質(zhì)。

  • 水化復(fù)合物:為了得到適合生物應(yīng)用的 DOPE - ICG 制劑,需要對(duì)上述固體或半固體物質(zhì)進(jìn)行水化。加入適量的緩沖液(如磷酸鹽緩沖液,pH 7.2 - 7.4),緩沖液的體積可根據(jù)所需復(fù)合物的濃度來(lái)確定,一般為 1 - 10mL。然后通過(guò)超聲處理或溫和攪拌,使 DOPE - ICG 復(fù)合物均勻地分散在緩沖液中,形成穩(wěn)定的膠體溶液。

2.化學(xué)偶聯(lián)法

  • 原理

    • 利用 DOPE 和 ICG 上的活性官能團(tuán)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)偶聯(lián)。例如,如果 ICG 分子含有羧基(-COOH),DOPE 分子含有氨基(-NH?),可以通過(guò)偶聯(lián)試劑(如 1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亞胺(EDC)和 N - 羥基琥珀酰亞胺(NHS))來(lái)促進(jìn)酰胺鍵(-CONH -)的形成,從而將 ICG 和 DOPE 化學(xué)偶聯(lián)在一起。

3.步驟

  • 修飾反應(yīng)物(如果需要):首先檢查 DOPE 和 ICG 的化學(xué)結(jié)構(gòu),確定合適的反應(yīng)基團(tuán)。如果反應(yīng)基團(tuán)需要活化或修飾,要提前進(jìn)行相應(yīng)的化學(xué)處理。例如,對(duì)于含有羧基的 ICG,可以通過(guò)與 NHS 反應(yīng)生成活性酯,使其更容易與氨基反應(yīng)。

  • 溶解反應(yīng)物:將 DOPE 和 ICG 分別溶解在合適的反應(yīng)溶劑中。常用的反應(yīng)溶劑為緩沖液,如 MES 緩沖液(pH 5.5 - 6.5)或磷酸鹽緩沖液(pH 7.0 - 7.4),以提供合適的反應(yīng)環(huán)境。例如,將 DOPE 和 ICG 分別溶解在不同的緩沖液中,濃度可根據(jù)反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量比來(lái)確定,一般為 0.1 - 10mM。

  • 添加偶聯(lián)試劑:在攪拌的條件下,向反應(yīng)體系中依次加入偶聯(lián)試劑 EDC 和 NHS。EDC 和 NHS 的用量要根據(jù) ICG 和 DOPE 上反應(yīng)基團(tuán)的摩爾數(shù)來(lái)確定,一般 EDC 過(guò)量 1.2 - 1.5 倍,NHS 過(guò)量 1 - 1.2 倍。例如,若 ICG 的羧基摩爾數(shù)為 1mmol,可加入 1.2 - 1.5mmol 的 EDC 和 1 - 1.2mmol 的 NHS。

  • 進(jìn)行反應(yīng):將反應(yīng)體系在適當(dāng)?shù)臏囟龋ㄈ缡覝鼗?4 - 10℃)下反應(yīng)數(shù)小時(shí)至過(guò)夜。反應(yīng)過(guò)程中可以通過(guò)薄層色譜(TLC)或高效液相色譜(HPLC)來(lái)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。例如,對(duì)于反應(yīng)較慢的體系,可以在室溫下反應(yīng) 24 - 48 小時(shí),期間每隔一段時(shí)間取樣進(jìn)行 TLC 或 HPLC 分析,觀(guān)察反應(yīng)物和產(chǎn)物的變化。

  • 產(chǎn)物純化:反應(yīng)結(jié)束后,需要對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的反應(yīng)物、偶聯(lián)試劑和副產(chǎn)物。常用的純化方法有柱層析、透析和超濾等。例如,采用柱層析法,選擇合適的固定相(如硅膠柱)和流動(dòng)相(如不同比例的有機(jī)溶劑和緩沖液混合液),根據(jù)產(chǎn)物和雜質(zhì)的極性差異進(jìn)行分離,得到純凈的 DOPE - ICG 偶聯(lián)物。

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